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    鴨瘟抗體(DVE Ab)酶聯(lián)免疫分析,您了解多少?

    發(fā)布時間: 2014-10-07  點擊次數(shù): 1080次

    鴨瘟抗體(DVE Ab)酶聯(lián)免疫定性
    實驗原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中鴨瘟抗體(DVE Ab)表達。用純化的抗原包被微孔
    板,制成固相抗原,可與樣品中鴨瘟抗體(DVE Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和
    其他成分后再與 HRP 標記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后
    加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃
    色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本
    中鴨瘟抗體(DVE Ab)的存在與否。
    鴨瘟抗體(DVE Ab)標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    1.
    編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
    孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
    2.
    加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先
    加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不
    觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
    3.
    溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
    4.
    配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
    5.
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
    重復(fù) 5 次,拍干。
    6.
    加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
    7.
    溫育:操作同 3。
    8.
    洗滌:操作同 5。
    9.
    顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    10 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn))。
    11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
    液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
    計算和結(jié)果判定:
    試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
    臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為鴨瘟抗體(DVE Ab)陰性
    陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為鴨瘟抗體(DVE Ab)陽性
    。
    鴨瘟抗體(DVE Ab)注意事項
    1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
    2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
    用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
    4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物請避光保存。
    6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm
    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須
    注意安全。

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