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    ELISA試劑盒的必要條件

    發(fā)布時間: 2017-12-25  點擊次數(shù): 1307次

    一.ELISA試劑盒的試劑,超卓的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測效果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的構(gòu)成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學查驗一般均用板式點。本文將敘說板式ELISA各個操作進程的留心要害,珠式、管式及磁性球ELSIA,國外試劑均與特別儀器協(xié)作運用,嚴峻遵照規(guī)矩操作,必能得出準確的效果。 
     
    二.可用作ELISA試劑盒的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其間某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均對等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只需待血清天然凝聚、縮短后即可取得。除特別狀況外,在醫(yī)學查驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可對等運用。
     
    三. ELISA試劑盒血清標本可按常規(guī)辦法搜集,應留心避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為符號的ELISA測定中,溶血標本可能會添加非特異性顯色。  
     
    四.血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其間的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。 
     
    五.一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,逾越一周測定的需低溫冰存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上劇烈振動?;鞚峄蛴谐练e的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。重復凍融會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測,宜少數(shù)分裝冰存。保存血清自搜集時就應留心無菌操作,也可參與恰當防腐劑。  
     
    六.按試劑盒說明書的要求預備試驗中需用的試劑。ELISA試劑盒頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液運用pH計丈量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
     
    七.在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不可濺起,不可發(fā)生氣泡。
     
    八.ELISA試劑盒加標本一般用微量加樣器,按規(guī)矩的量參與板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以發(fā)生穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清,可在試管中按規(guī)矩的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參與稀釋液,再在其參與血清標本,然后在微型顫抖器上顫抖1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物運用液和底物用液時可用定量多道加液器,使加液進程靈敏結(jié)束

     

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